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實(shí)驗(yàn)結(jié)果這么難重復(fù),怎樣才能提高重復(fù)性呢?

2020/3/18 14:50:33??????點(diǎn)擊:


實(shí)驗(yàn)結(jié)果這么難重復(fù),怎樣才能提高重復(fù)性呢?


剛開(kāi)始做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,有一次發(fā)現(xiàn)一篇文章所用的細(xì)胞,處理藥物和我現(xiàn)在的課題一模一樣。那么我想用文章中的處理時(shí)間及濃度是不是可以做出來(lái)同樣的結(jié)果?當(dāng)時(shí)已經(jīng)很晚了,看我還沒(méi)走,一個(gè)前輩問(wèn)我怎么還不回去。我說(shuō)我正在重復(fù)一篇文章中的實(shí)驗(yàn),這時(shí)她意味深長(zhǎng)的說(shuō)了一句話:“重復(fù)別人的實(shí)驗(yàn)?有時(shí)候你連自己做過(guò)的實(shí)驗(yàn)可能都重復(fù)不出來(lái)!當(dāng)時(shí)我聽(tīng)后不以為然,心想:怎么可能連自己的實(shí)驗(yàn)都重復(fù)不出來(lái)?那肯定是自己的實(shí)驗(yàn)水平有問(wèn)題唄。工作之后作為技術(shù)支持常接聽(tīng)客戶(hù)咨詢(xún)電話,有客戶(hù)會(huì)電話進(jìn)來(lái)表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)法重復(fù):即使用同樣的樣本、同樣的抗體,昨天可以做出來(lái)了,今天卻沒(méi)有條帶。有時(shí)候是抗體批次問(wèn)題,換了個(gè)批次實(shí)驗(yàn)就無(wú)法重復(fù)了。不僅我們普通實(shí)驗(yàn)者,一些學(xué)術(shù)權(quán)威們也有這樣的困惑:耶魯大學(xué)某著名的病理學(xué)家曾用抗體開(kāi)發(fā)了一個(gè)黑色素瘤治療的診斷試劑。但花費(fèi)了大量的時(shí)間和金錢(qián)后,卻發(fā)現(xiàn)新的抗體無(wú)法重復(fù)之前的結(jié)果,原來(lái)這個(gè)抗體特異性存在問(wèn)題,只能被迫停止了這個(gè)項(xiàng)目。因此近幾年來(lái),很多學(xué)者都紛紛認(rèn)為應(yīng)該重視起抗體的問(wèn)題,同時(shí)也要求抗體行業(yè)進(jìn)行自我約束。

 

為什么實(shí)驗(yàn)結(jié)果很難重復(fù)呢?主要有5個(gè)方面的原因:1、參考文獻(xiàn);2、生產(chǎn)商;3、經(jīng)銷(xiāo)商;4、搜索引擎;5、同行審閱。下面讓我們具體來(lái)看下這5個(gè)方面以及如何解決這幾方面帶來(lái)的困擾。

 

1、參考文獻(xiàn):是我們選擇抗體的主要方式。當(dāng)我們選擇抗體的時(shí)候,最常用的方法是聽(tīng)取同行的推薦或者查閱參考文獻(xiàn),看看別人用了什么得到了滿(mǎn)意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。但是通常會(huì)遇到2個(gè)問(wèn)題:當(dāng)你用搜索引擎去搜尋抗體時(shí),發(fā)現(xiàn)有的文章并沒(méi)有標(biāo)明使用的哪個(gè)抗體;或者所查文獻(xiàn)標(biāo)注使用了另一參考文獻(xiàn)的抗體,你又進(jìn)一步查閱--——找了半天,卻發(fā)現(xiàn)最初的那個(gè)作者并沒(méi)有標(biāo)明到底用了具體哪個(gè)抗體。所以有的參考文獻(xiàn)的缺點(diǎn)就是沒(méi)有抗體的具體信息。

 

在這種背景下,我們需要選擇性地參考參考文獻(xiàn)。一個(gè)簡(jiǎn)單粗暴的方法,就是選擇那些影響因子比較高的文章,比如大于5分,可以在一定程度上保證當(dāng)你Follow別人的實(shí)驗(yàn)步驟時(shí),有更大的可能重復(fù)出來(lái);也可以選擇那些標(biāo)注了抗體貨號(hào)、稀釋比例和生產(chǎn)廠家的文章,減少反復(fù)試驗(yàn)各種抗體的時(shí)間。

 

2、用生產(chǎn)商的網(wǎng)站:有些公司號(hào)稱(chēng)生產(chǎn)商,但是卻只生產(chǎn)極少量的抗體,絕大部分抗體是從其他公司OEM過(guò)來(lái)的,因此質(zhì)量參差不齊。有些公司不告訴客戶(hù)怎么驗(yàn)證抗體,而讓用戶(hù)自己去檢測(cè)。有些公司雖然秀了數(shù)據(jù),但是這些數(shù)據(jù)卻非常有限,僅僅是告訴你這個(gè)抗體可以用于何種應(yīng)用,并沒(méi)有說(shuō)明到底檢測(cè)的是什么?是否有交叉反應(yīng)?往往我們抱怨比較多的是這些公司不提供完整的驗(yàn)證抗體的數(shù)據(jù),批次質(zhì)量不穩(wěn)定。

 

作為研究人員,一定要選擇重視抗體質(zhì)量的真正的生產(chǎn)商。CST一直以為科研人員提供最高質(zhì)量的抗體作為使命,在生產(chǎn)過(guò)程中非常重視抗體特異性、靈敏度、批次間一致性的檢測(cè),并將驗(yàn)證數(shù)據(jù)公布在網(wǎng)站上,對(duì)于大家選擇抗體非常有幫助。有些未公布的驗(yàn)證失敗的數(shù)據(jù),如果研究人員問(wèn)詢(xún),CST的研發(fā)科學(xué)家都非常樂(lè)意分享。這就是為什么CST能夠?qū)掖潍@得“最佳抗體”、“最有用的網(wǎng)站”、“最佳客戶(hù)服務(wù)”、“研究者的首選抗體”、“五個(gè)第一”等殊榮的原因。

 

選擇一個(gè)靠譜的廠家至關(guān)重要,其實(shí)從廠家所提供的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的詳細(xì)程度就可以來(lái)判斷這個(gè)廠家是不是可靠,詳細(xì)并不是說(shuō)篇幅越長(zhǎng)越好,而是看實(shí)驗(yàn)種類(lèi)是不是經(jīng)過(guò)驗(yàn)證,有沒(méi)有提供實(shí)驗(yàn)所需要的詳細(xì)試劑。CST所有的抗體都是經(jīng)過(guò)嚴(yán)格篩選和驗(yàn)證的,實(shí)驗(yàn)步驟都是經(jīng)過(guò)優(yōu)化的,我們希望客戶(hù)通過(guò)網(wǎng)站就可以發(fā)現(xiàn)更多產(chǎn)品的相關(guān)信息,而且我們花費(fèi)了很多時(shí)間來(lái)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方法,比如在WB一抗稀釋液這一步,到底是用脫脂奶粉稀釋還是BSA稀釋?zhuān)梢钥凑f(shuō)明書(shū)下方的紅色方框,可能有時(shí)候差異不是很大,但很多時(shí)候差異還是很明顯的;在說(shuō)明書(shū)右方也會(huì)提到具體的稀釋比例以及稀釋buffer,比如IHC到底是用檸檬酸鹽修復(fù)還是EDTA修復(fù),在說(shuō)明書(shū)上都可以看到,同時(shí)我們也有很多小冊(cè)子,像WB成功實(shí)驗(yàn)指南,IHC實(shí)驗(yàn)成功指南等等,而且還會(huì)檢測(cè)每一個(gè)批號(hào),確保新的批號(hào)和舊的批號(hào)是一樣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,對(duì)抗體的靈敏度、 特異性、反應(yīng)性、穩(wěn)定性方面都會(huì)做相關(guān)的測(cè)試。

 

3、經(jīng)銷(xiāo)商:當(dāng)今科研市場(chǎng),供應(yīng)商的競(jìng)爭(zhēng)十分激烈,非正規(guī)的供應(yīng)商如果想走出一條活路,即使它沒(méi)有任何生產(chǎn)商的授權(quán),也會(huì)轉(zhuǎn)賣(mài)很多公司的產(chǎn)品。有的供應(yīng)商缺乏專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員,對(duì)產(chǎn)品本身不了解,不能給客戶(hù)做出專(zhuān)業(yè)的正確的推薦;非正規(guī)的供應(yīng)商經(jīng)常從大的供應(yīng)商那里買(mǎi)來(lái)抗體,分裝后重新貼上標(biāo)簽進(jìn)行銷(xiāo)售;有的供應(yīng)商甚至直接出售假貨、以次充好,把產(chǎn)品拿過(guò)來(lái)分裝然后貼上知名產(chǎn)品的標(biāo)簽。因?yàn)檎麄€(gè)市場(chǎng)不透明,導(dǎo)致用戶(hù)所看到的產(chǎn)品信息,并不等同于生產(chǎn)商所提供的信息,最終導(dǎo)致科研人員買(mǎi)到質(zhì)量很差的產(chǎn)品甚至假貨。

 

作為研究人員,一定要擦亮眼睛,盡可能從生產(chǎn)商授權(quán)的代理商處購(gòu)買(mǎi)。授權(quán)代理商可以從生產(chǎn)商的網(wǎng)站上查詢(xún)得到,也可以直接打電話給生產(chǎn)商詢(xún)問(wèn)。詢(xún)問(wèn)實(shí)驗(yàn)室的老師和管理人員,尋找長(zhǎng)期合作的可靠的代理商。點(diǎn)擊此處查看CST 授權(quán)代理商。

 

4、第三方產(chǎn)品平臺(tái)網(wǎng)站,比如CiteAb, Biocompare等,其實(shí)很多產(chǎn)品都是不斷更新的。排名最靠前,引用文獻(xiàn)最多的并不一定是這個(gè)供應(yīng)商最好的產(chǎn)品,而僅僅是生產(chǎn)最久的產(chǎn)品。

 

因此,除了看引用文獻(xiàn)最多的產(chǎn)品,還可以在平臺(tái)通過(guò)關(guān)鍵詞搜索,查看符合條件的多個(gè)產(chǎn)品,結(jié)合生產(chǎn)商網(wǎng)站上提供的驗(yàn)證數(shù)據(jù)等進(jìn)行綜合考量。就抗體而言,實(shí)驗(yàn)多檢測(cè)來(lái)自于人、小鼠、大鼠的樣本,作為來(lái)自于更遠(yuǎn)源種屬的兔單抗,其特異性和靈敏度更好,可優(yōu)先選擇。

 

5、同行審閱。往往發(fā)表文章的時(shí)候,不需要提供詳細(xì)的操作方法及全部的驗(yàn)證數(shù)據(jù)??赡苡行┮寻l(fā)表的實(shí)驗(yàn)結(jié)果并沒(méi)有做3-5次的重復(fù)試驗(yàn),或者做了之后只是挑選了一幅滿(mǎn)意的圖片。

 

如果同行審閱們有更加嚴(yán)格的評(píng)審標(biāo)準(zhǔn),比如讓用戶(hù)盡可能的提供詳細(xì)的產(chǎn)品貨號(hào)、稀釋比例及試驗(yàn)步驟,或者有一個(gè)專(zhuān)門(mén)的網(wǎng)頁(yè)來(lái)上傳所有的原始圖片(用戶(hù)可以參考各出版社的網(wǎng)站,排版說(shuō)明都有不同的要求,有些雜志還會(huì)有專(zhuān)門(mén)的網(wǎng)頁(yè)來(lái)存放這些圖片)供他人參考,不僅會(huì)促使整個(gè)學(xué)術(shù)界形成一種好的風(fēng)氣,也會(huì)減少實(shí)驗(yàn)不可重復(fù)、造假等問(wèn)題。

 

CST作為世界領(lǐng)先的抗體生產(chǎn)商,我們會(huì)一如既往地重視出廠前的抗體驗(yàn)證,即特異性、靈敏度、批次間一次性的檢驗(yàn),研發(fā)生產(chǎn)抗體的科學(xué)家為大家提供最專(zhuān)業(yè)的技術(shù)支持,網(wǎng)站提供海量的驗(yàn)證數(shù)據(jù)和信號(hào)通路、Phosphosite蛋白修飾數(shù)據(jù)庫(kù)等學(xué)術(shù)資源,為實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性貢獻(xiàn)我們的專(zhuān)業(yè)力量。我們的口號(hào)是“不要讓抗體成為您實(shí)驗(yàn)的變量”,讓多方努力,共同提高整個(gè)試劑行業(yè)的可重復(fù)性。

 

除了上述這幾個(gè)宏觀方面,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差還有其他方面的原因。如研究人員沒(méi)有嚴(yán)格遵循生產(chǎn)商的操作步驟,或者隨意改變實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),使實(shí)驗(yàn)變量增加。因此說(shuō),除了要有質(zhì)量非??煽康目贵w,還需遵循生產(chǎn)商的操作步驟,選擇合適的模型,客戶(hù)的真實(shí)反饋等其他方面也同等重要,后續(xù)請(qǐng)繼續(xù)關(guān)注我們的文章,看看如何從微觀方面來(lái)提高實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。