抗體查找方法
在查找抗體的時(shí)候,常常被多個(gè)抗體貨號和不同的抗體信息所困擾,不知道該如何選擇合適的抗體。本篇文章希望能為大家選擇合適的抗體提供幫助。
一、一抗(primary antibody)的選擇
1)蛋白的名稱及亞型。蛋白的名稱及亞型:某些蛋白具有多種不同的亞型,如Akt1、2、3,這需要在選擇抗體之前確定要研究的蛋白亞型。如果抗原選擇的是不同蛋白亞型共有的肽段區(qū)域,那我們需要選擇可以同時(shí)識別Akt1、2、3等多個(gè)亞型的抗體。
2)磷酸化修飾位點(diǎn)。檢測磷酸化修飾的蛋白,選擇抗體時(shí)則需知道修飾位點(diǎn)。
3)抗體已驗(yàn)證的應(yīng)用(如WB,IHC,IP等)。抗體一般會對抗體應(yīng)用(WB,IHC,IP, ChIP,IF,F(xiàn)low)進(jìn)行內(nèi)部驗(yàn)證,選擇抗體時(shí)需知道客戶的實(shí)驗(yàn)類型。
4)抗體能夠識別的樣本種屬??贵w一般會對不同種屬目標(biāo)樣本進(jìn)行內(nèi)部驗(yàn)證,選擇抗體時(shí)需知道客戶的樣本來源。
5)制備抗體的抗原??贵w是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來,其中的免疫原包括:全長蛋白、蛋白片段、多肽、全有機(jī)體(如:細(xì)菌)或細(xì)胞。
6)抗體的動物來源。一抗的動物來源多為兔(rabbit)和小鼠(mouse),如果客戶已有二抗,選擇抗體時(shí)需知二抗的類型。
二、二抗(secondary antibody)的選擇
1)要考慮一抗的物種來源。例如:如果選擇的一抗是小鼠的單/多克隆抗體,二抗則選抗小鼠的二抗anti-mouse secondary antibody。
2)二抗的選擇要考慮具體的應(yīng)用類型。酶聯(lián)(HRP或AP偶聯(lián))二抗常用于免疫印跡和免疫組化等,熒光標(biāo)記二抗則常用于免疫熒光和流式等。
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